Πώς να παρακολουθείτε την ανάπτυξη κυττάρων

Οι επιστήμονες παρακολουθούν ρουτίνα την ανάπτυξη κυττάρων. Μπορεί να είναι μέρος συντήρησης κυττάρων, ή μέρος πειράματος. Για παράδειγμα, ένα πείραμα θα μπορούσε να ρυθμιστεί για να συγκρίνει την επίδραση τριών διαφορετικών φαρμάκων στην ανάπτυξη κυττάρων. Σε αυτή την περίπτωση, τέσσερις φιάλες κυττάρων στην ίδια συγκέντρωση ρυθμίζονται: μία χωρίς φάρμακα ως έλεγχος, και μία για καθένα από τα τρία φάρμακα. Κύτταρα αφαιρούνται από τις φιάλες σε τακτικά διαστήματα, π.χ. καθημερινά, μετρώνται και καταγράφονται. Οι αριθμοί κυττάρων σχεδιάζονται σε γράφημα έναντι χρόνου· η επίδραση των φαρμάκων στην ανάπτυξη κυττάρων μπορεί να συγκριθεί με τον έλεγχο.

Απαιτούμενα Υλικά

• Κύτταρα σε διάλυμα
• Σωλήνες δοκιμής
• Πιπέτες
• Μέσο ανάπτυξης
• Ηματοκυτταρίθμη (Hemacytometer)
• Κάλυψη lamina
• Χειροκίνητος μετρητής (hand tally counter)
• Χαρτί λεντζών (lens paper)
• Τρυπάνιο μπλε (Trypan blue)
• Μικροσκόπιο

Οδηγίες

1. Κύτταρα:
   • Κουνήστε απαλά τα κύτταρα για να πάρετε ισόμορφη διάλυση. Αφαιρέστε όγκο κύτταρων, π.χ. 1.0 χιλιοστόλιτρο (ml), με πιπέτα και μεταφέρετε σε σωλήνα δοκιμής. Ραrefy τα κύτταρα για να δώσετε 100,000 έως 500,000 κύτταρα ανά ml - αυτό θα πρέπει να παρέχει τα περίπου 100 κύτταρα που απαιτούνται για στατιστική σημαντικότητα عند το μέτρημα.
   • Διαλύστε τα κύτταρα, αν είναι απαραίτητο, προσθέτοντας 9.0 ml μέσου στους 1.0 ml κύτταρων. Μείξτε και καταγράψτε την διαλύση. Αν τα κύτταρα είναι ακόμα πολύ συγκεντρωμένα, αφαιρέστε 1.0 ml διαλυμένων κυττάρων σε καινούργιο σωλήνα, προσθέστε 9.0 ml μέσου, μειξτε και καταγράψτε τη διαλύση. Τα μαμíferα κύτταρα συνήθως αναπτύσσονται στην περιοχή 100,000 έως 5,000,000 ανά ml, οπότε 0 έως 2 διαλύσεις πρέπει να είναι αρκετές.
   • Μείξτε τα κύτταρα από την τελική διαλύση. Αφαιρέστε μικρό όγκο, π.χ. 0.1 ml, και βάλτε σε καινούργιο σωλήνα. Προσθέστε ίσο όγκο τρυπάνιου μπλε, μειξτε και καταγράψτε τη διαλύση. Τα νεκρά κύτταρα καταναλώνουν τρυπάνιο μπλε και θα εμφανίζονται μπλε κάτω από το μικροσκόπιο.
2. Μέτρημα:
   • Πολίστε το ηματοκυτταρίθμη και το καλύμμα με χαρτί λεντζών, και βάλτε το καλύμμα στο πλέγμα ηματοκυτταρίθμου. Προσθέστε μια στάγνα διαλυμένων κυττάρων στο σχήμα V δίπλα στο πλέγμα. Τα κύτταρα κινούνται κάτω από το καλύμμα με καπιλλαριδράστηση.
   • Τοποθετήστε το λάστιχο στο μικροσκόπιο, εστιάστε στο πλέγμα και χρησιμοποιήστε χειροκίνητο μετρητή για να μετρήσετε τα ζωντανά, όχι μπλε, κύτταρα. Τα κύτταρα δεν πρέπει να επικαλύπτονται· αν είναι πολύ πυκνά, εκτελέστε άλλη διάλυση. Αν τα κύτταρα είναι πολύ αραιά, προετοιμάστε πιο συγκεντρωμένο δείγμα.
   • Αφαιρέστε το ηματοκυτταρίθμη, καθαρίστε, φορτώστε ξανά και μετρήστε πάλι. Μετρήστε κάθε δείγμα κυττάρων τρεις φορές.
3. Υπολογισμός:
   • Υπολογίστε τον αριθμό των κυττάρων ανά ml. Το πλέγμα του ηματοκυτταρίθμου χωρίζεται σε 9 μεγάλα τετράγωνα, καθένα με όγκο 0.1 ml.
   • Διαγράψτε τον αριθμό των μετρημένων κυττάρων με τον αριθμό των μεγάλων τετραγώνων που χρησιμοποιήθηκαν (εννέα αν χρησιμοποιείτε ολόκληρο το πλέγμα), και πολλαπλασιάστε με 10,000 για να πάρετε κύτταρα ανά ml. Πολλαπλασιάστε με τον παράγοντα διαλύσεων για την τελική συγκέντρωση.
   • Καταγράψτε την ημερομηνία, το δείγμα, τα μετρήματα κυττάρων, τους παράγοντες διαλύσεων και τον τελικό αριθμό κυττάρων ανά ml. Προετοιμάστε γράφημα με αριθμούς κυττάρων σχεδιασμένους εναντίον χρόνου για να δείξετε την ανάπτυξη κυττάρων.