Πρωτόκολλο Elektrocompetent Κυττάρων: Εντοπισμός και Παραγωγή

Οι μοριακοί βιολόγοι τοποθετούν τμήματα DNA (πλασμίδες) που περιέχουν γονίδια ενδιαφέροντος σε βακτήρια. Είναι απλός τρόπος αναπαραγωγής του γονιδίου/παραγωγής του προϊόντος του (π.χ. ινσουλίνη).

Ηλεκτροπόρηση (Electroporation)

Μια μέθοδος εισαγωγής πλασμίδας σε βακτήρια. Βακτήρια και DNA ανακατεύονται σε σωλήνα και εκτίθενται σε ηλεκτρικό πεδίο (electroporation machine). Το πεδίο ανοίγει μικρές τρύπες στα βακτήρια, επιτρέποντας την είσοδο του DNA. Τα βακτήρια που λαμβάνουν DNA πιο αποτελεσματικά ονομάζονται elektrocompetent κύτταρα.

Μέθοδος Παραγωγής Elektrocompetent Βακτηρίων

Οι elektrocompetent βακτήρια (π.χ. E. coli) παράγονται με σειρά επαναλαμβανόμενων κεντριφυγάσεων: πρώτα αφαίρεση μέσου ανάπτυξης και αντικατάσταση με ultra-pure νερό, τελικά αντικατάσταση νερού με γλυκερόλη. Στα τελικά βήματα, τα βακτήρια αναταράσσονται σε μικρό όγκο γλυκερόλης, διαιρούνται σε σωλήνους, παγώνουν σε υγρό αζώτο και αποθηκεύονται μακροπρόθεσμα σε ψυγείο -80°C (-112°F).

Σημεία Προσοχής

• Το πρωτόκολλο γίνεται συνήθως με μεγάλους όγκους (μεγάλοι φιάλες, αναμείκτες, κεντριφούγες).
• Κρίσιμο: όλα τα βήματα από τη συγκομιδή έως την αποθήκευση πρέπει να γίνονται σε πάγος.
• Απολύτως απαραίτητο το ultra-pure νερό.