Οι επιστήμονες διατηρούν ποικίλες κυτταρικές γραμμές για να κατανοήσουν πώς μεγαλώνουν, πολλαπλασιάζονται και πεθαίνουν τα κύτταρα. Για συντήρηση, διαιρούν περιοδικά (subculture/split) σε φρέσκο μέσο ανάπτυξης.
Υποκουλτούρα (Subculture)
Τα κύτταρα αναπτύσσονται αναπτυγμένα στο μέσο ή προσκολλημένα σε πετρί/φιάλες. Καθώς μεγαλώνουν, γίνονται πιο πυκνά, καταναλώνουν θρεπτικά και εκκρίνουν απόβλητα. Γι' αυτό πρέπει να διαιρούνται σε μικρότερους αριθμούς και να δίνεται φρέσκο μέσο (συνήθως συγκεκριμένος αριθμός κύτταρων ανά πετρί).
Μέθοδος
- Αναπτυγμένα κύτταρα: Μετρήστε και αραιώστε σε φρέσκο μέσο.
- Προσκολλημένα κύτταρα: Αφαιρέστε καταναλωμένο μέσο, πλένετε nhẹ με saline buffer. Εκθέστε σε ένζυμο ή λύση αλατιού για διαλwicklung δεσμών κύτταρο-κύτταρο και κύτταρο-πετρί (το τρυψίνη είναι το πιο κοινό). Σταματήστε την ενζυμική αντίδραση με προσθήκη ζώου serum, βάλτε το μείγμα σε σωλήνα και κεντριφυγάστε. Αφαιρέστε το υγρό, αναταράξτε nhẹ σε φρέσκο μέσο, μετρήστε και διασπορίστε στην απαιτούμενη πυκνότητα.
Σημεία Προσοχής
- Υποκουλτούρα σε αseptικό περιβάλλον με αseptικό εξοπλισμό για αποφυγή μολύνσεων (βακτήρια/μύκητες).
- Πυκνότητα κύτταρων, χρόνος στο τρυψίνη και συχνότητα υποκουλτούρας εξαρτώνται από τον τύπο κύτταρου.
- Χρησιμοποιήστε μικροσκόπιο για τακτική παρακολούθηση.