Το γονίδιο LacZ κωδικοποιεί το ένζυμο βητα-γαλακτοσιδάση, το οποίο διασπά τη λάκτοση σε γλυκόζη και γαλακτόζη. Το ένζυμο διασπά επίσης την ένωση X-gal, παράγοντας μπλε χρώμα που χρησιμοποιείται ως marker/reporter για την παρουσία του LacZ στα κύτταρα.
Οι επιστήμονες συνδέουν το γονίδιο LacZ με γονίδιο ενδιαφέροντος (π.χ. ινσουλίνη) σε πλασμίδα. Χρησιμοποιούν χημικές ή ηλεκτρικές μεθόδους για εισαγωγή της πλασμίδας στα κύτταρα. Τα κύτταρα ελέγχονται για έκφραση LacZ (βητα-γαλακτοσιδάση), η οποία σημαίνει και την παρουσία του γονιδίου ινσουλίνης.
Μετά την τρανσфекσying, τα κύτταρα καλλιεργούνται σε πετρί. Αφαιρείται το μέσο ανάπτυξης, πλένονται με φωσφικό ταμπώνικο αλάτι (PBS). Χρησιμοποιείται λύση σταθεροποίησης (φορμαλδεΰδη, μεθανόλη, γλουταραλδεΰδη) για 2 λεπτά. Αφαιρείται η σταθεροποιητική και ξαναπλένονται με PBS.
Προστίθεται φρεσκάδι λύση χρωματισμού (X-gal, καlium φερρι-κυανούχο, καlium φερρο-κυανούχο) για όλη τη νύχτα. Τα κύτταρα πλένονται πάλι με PBS. Αν υπάρχει το LacZ, η βητα-γαλακτοσιδάση διασπά την X-gal και τα κύτταρα γίνονται μπλε.
Πνευματικά δικαιώματα © Γνώση Υπολογιστών Όλα τα δικαιώματα διατηρούνται.